医用清洗剂蛋白酶活力，是表征产品中蛋白酶活性强度的关键参数，决定了其在规定条件下分解医疗器械表面蛋白类污染物的能力。医用清洗剂蛋白酶活力检测是企业落实产品质量责任的重要举措，不仅能确保产品符合YY/T0734等行业标准要求，还能通过精准把控酶活力保障清洗效果一致性，降低因产品不合格面临的市场监管风险与品牌信誉损失。

　　蛋白酶活力是含酶医用清洗剂的核心性能指标，T/WSJD002-2019《医用清洗剂卫生要求》针对蛋白酶活力检测制定了标准化操作步骤与明确的结果判定准则，是检测工作的核心依据。

　　医用清洗剂蛋白酶活力检测步骤

　　步骤1：检测前准备

　　试剂配制：按标准要求配制磷酸缓冲液（pH=6.0）、偶氮酪蛋白底物液、三氯乙酸（TCA）终止液，所有试剂配制完成后需验证性能，如缓冲液pH值校准。

　　仪器调试：将恒温水浴锅调至37℃±0.2℃，分光光度计预热30分钟并校准波长至440nm，移液管、容量瓶等器具提前清洗、干燥、校准。

　　样品准备：随机抽取待检测医用清洗剂，液体样品摇匀后取样，固体样品研磨成粉末后取样，确保样品具有代表性。

　　步骤2：样品稀释与过滤

　　取1.00mL待测样品，用已校准的磷酸缓冲液定容至合适体积，稀释原则为使酶活力处于3.7U/mL～5.6U/mL的标准检测范围，具体稀释倍数根据产品标注酶活力估算。

　　将稀释后的样品通过四层无菌纱布过滤，去除样品中的不溶性杂质，滤液收集于洁净试管中，做好标记，滤液需在30分钟内使用。

　　步骤3：恒温酶促反应

　　取2支洁净试管，分别标注“样品管”与“空白管”。

　　样品管：加入1mL待测滤液+2mL偶氮酪蛋白底物液，轻轻摇匀后立即放入37℃恒温水浴锅，精准计时10分钟。

　　空白管：加入1mL待测滤液+2mL磷酸缓冲液，轻轻摇匀后同样放入37℃恒温水浴锅，与样品管同步计时。

　　步骤4：反应终止与沉淀

　　样品管反应满10分钟后，立即取出，加入2mLTCA终止液，摇匀后静置10分钟，使未被分解的蛋白质完全沉淀。

　　空白管在与样品管相同的时间点取出，加入2mLTCA终止液，再加入2mL偶氮酪蛋白底物液，摇匀后静置10分钟，此操作是为了消除样品本身对吸光度的干扰。

　　步骤5：过滤与吸光度测定

　　将样品管与空白管中的液体分别用定性滤纸过滤，收集滤液于洁净比色皿中。

　　以空白管滤液为参比，在分光光度计440nm波长下，测定样品管滤液的吸光度值（A），测定时比色皿需擦拭干净，避免划痕影响读数，每个样品测定3次，取平均值。

　　步骤6：酶活力计算

　　根据测得的吸光度平均值，查阅T/WSJD002-2019表B.1《吸光与酶浓度对照表》，换算出样品的酶浓度（c，U/mL）。

　　结合样品稀释倍数，计算出原始样品的蛋白酶活力，公式为：原始酶活力（U/mL）=换算酶浓度×稀释倍数；固体样品则换算为U/g，计算结果保留4位有效数字。

　　医用清洗剂蛋白酶活力检测结果判定准则

　　T/WSJD002-2019从酶活力实测值、稳定性、产品标注符合性三个维度，制定了蛋白酶活力检测结果的判定标准，判定结果分为“合格”与“不合格”两类，具体准则如下：

　　（1）合格判定标准

　　实测值与标注值符合性：蛋白酶活力实测值≥产品标注值的80%，这是对产品标称性能的核心验证要求。

　　有效期内稳定性：若检测的是有效期内的样品，结合产品出厂时的酶活力检测数据，计算得出的酶活力下降率≤20%。

　　平行样偏差要求：同一样品的平行样检测结果相对偏差≤5%，确保检测结果的重复性。

　　（2）不合格判定标准

　　出现以下任一情况，即可判定样品蛋白酶活力检测不合格：

　　蛋白酶活力实测值＜产品标注值的80%；

　　有效期内样品的酶活力下降率＞20%；

　　平行样检测结果相对偏差＞5%，且重新检测后仍无法达标；

　　检测过程中发现样品存在变质、污染，或试剂、仪器不符合标准要求，且无法排除对结果的影响。