在化妆品安全评估体系中，原料的急性经口毒性试验是核心环节之一。该试验不仅能评估原料意外被人体吞咽后可能产生的健康风险，更能为后续毒理学试验剂量设定、原料毒性分级及产品标签标识提供关键数据支撑。

　　化妆品原料急性经口毒性试验样品制备

　　根据原料特性，采用以下标准化方法制备受试物，确保剂量精准可控：

　　固体原料处理：

　　粉末状原料：若水溶性良好，直接用纯水溶解，配制成不同浓度的溶液（浓度梯度需覆盖预试验预估的毒性范围）；

　　难溶性固体：用CMC-Na溶液（浓度通常为0.5%-1%）或植物油制成混悬液，需用匀浆机充分搅拌（转速≥3000r/min，搅拌时间≥5min），确保混悬均匀，且静置1小时内无明显沉淀；

　　注意事项：若原料含杂质或颗粒，需先过80目筛，避免堵塞灌胃针，同时记录原料纯度（如纯度98%以上需标注，纯度较低时需说明杂质成分，避免杂质影响毒性结果）。

　　液体原料处理：

　　易流动、水溶性液体：直接用纯水稀释，根据预试验结果设定稀释倍数（如10倍、20倍梯度），确保各剂量组浓度呈等比或等差分布；

　　黏稠液体（如油脂、树脂）：用植物油稀释（稀释比例不超过1:5，避免过度稀释导致剂量体积过大），或加热（温度≤40℃，避免高温破坏原料毒性成分）降低黏度后直接使用；

　　注意事项：液体原料需测定密度，用于计算灌胃体积（确保每只动物摄入的实际剂量准确，公式：灌胃体积=（剂量mg/kg×动物体重kg）/受试物浓度mg/mL）。

　　样品稳定性与均一性验证：

　　稳定性：制备后的受试物需在试验环境（温度20-25℃，湿度40%-60%）下放置24小时，观察外观变化（如分层、沉淀、变色），若不稳定需现配现用；

　　均一性：混悬液需在灌胃前每10分钟搅拌1次，或采用恒速搅拌装置，同时抽取不同部位样品测定浓度，相对偏差需≤5%，确保各动物摄入剂量一致。

　　化妆品原料急性经口毒性试验动物分组

　　动物分组是保障试验结果科学性的关键，需严格遵循《化妆品安全技术规范》（2022年版）要求，结合试验设计（如LD50测定、固定剂量法）合理设置组别，核心是确保各组动物在体重、性别、健康状况等方面具有可比性。

　　（1）实验动物选择：优先选用啮齿类动物

　　根据规范要求，急性经口毒性试验首选SPF级大鼠或小鼠，选择依据及要求如下：

　　物种选择：大鼠对经口毒性物质的敏感性更接近人体，且体型较大，便于灌胃操作和体征观察，优先推荐使用；小鼠适用于毒性较强、样品量较少的原料（如稀有植物提取物）；

　　性别与年龄：采用雌雄各半（除非原料明确仅用于单一性别产品，如男士剃须膏），年龄为6-8周龄（大鼠体重180-220g，小鼠体重18-22g），避免幼年或老年动物生理机能不稳定影响结果；

　　健康状态：实验前需在屏障环境下适应3-5天，观察动物活动、食欲、粪便等是否正常，剔除体重异常（偏离平均体重±10%）、有外伤或疾病症状的个体，确保动物基线一致。

　　（2）分组设计：按试验方法确定组别与样本量

　　不同试验方法对应的分组逻辑不同，需结合试验目的（如确定LD50、判断毒性分级）设计组别，常见分组方式如下：

　　传统LD50测定法（寇氏法、Bliss法）：

　　组别设置：需设置4-6个剂量组+1个空白对照组（给予等量介质，如纯水、植物油），每组动物数量为大鼠10只（雌雄各5）、小鼠15只（雌雄各7-8）；

　　剂量梯度：根据预试验结果设定，相邻剂量组的比值（剂量比）通常为1:1.5-1:2.0（如剂量组设为100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg、800mg/kg），确保覆盖“0%死亡”到“100%死亡”的剂量范围；

　　对照设置：空白对照组需与各剂量组在灌胃时间、体积、观察条件上完全一致，用于排除介质本身或操作对动物的影响（如灌胃损伤导致的异常反应）。

　　固定剂量法（适用于毒性较低的原料）：

　　组别设置：无需设置多个剂量组，仅需根据预试验选择1个固定剂量（如500mg/kg、2000mg/kg），每组10只动物（雌雄各5），同时设置空白对照组；

　　判定逻辑：若该剂量下无动物死亡或仅轻微毒性反应，可判定原料急性经口毒性为“低毒”；若出现≥50%动物死亡，则需降低剂量重新试验；

　　优势：减少动物用量，降低试验成本，适用于化妆品常用原料（如保湿剂、乳化剂）的初步毒性筛查。

　　上下增减剂量法（适用于未知毒性原料）：

　　组别设置：采用“逐只给药、动态调整”模式，初始选择1个中间剂量（如300mg/kg），根据前1只动物的反应（死亡则降低剂量，存活则升高剂量）确定下1只动物的剂量，无需预先设置固定组别；

　　样本量：通常需10-15只动物（雌雄各半），直至获得“死亡-存活”的剂量拐点，适用于毒性未知、样品量有限的新型原料。